Avaliação de diferentes alíquotas de enxaguadura para a contagem pelo método direto de Campylobacter spp. em carcaças de frango resfriadas / Evaluation of the different rinse volumes for performing the direct technique for Campylobacter spp. enumeration in chilled broiler carcasses

O método direto de detecção e contagem de Campylobacter spp. em carne de frango é de fácil execução, porém os volumes de 100 μL e de 400 μL, preconizados em algumas metodologias, muitas vezes impossibilitam a contagem de colônias pela ocorrência de crescimento confluente ou de microbiota contaminante. O objetivo do presente estudo foi de avaliar os diferentes volumes de enxaguadura de carne de frango com a finalidade de minimizar a interferência da microbiota contaminante, sem comprometer a sensibilidade do método. Os volumes de enxaguadura de 5, 10,50, 100 e 400 μL foram testados utilizando-se os meios seletivo diferenciais ágar carvão cefoperazona desoxicolato modificado (mCCDA) e ágar Bolton modificado. A presença de Campylobacter spp. foi confirmada por métodos fenotípicos e por PCR. No entanto, a estratégia de utilização de volumes menores do que 100 μL de enxaguadura não melhoraram o isolamento e a contagem de colônias de Campylobacter, porque houve diminuição da sensibilidade do ensaio. A provável solução para minimizar a interferência da microbiota contaminante seria desenvolver novos meios seletivos ou incorporá-los aos antimicrobianos já existentes...

Avaliação epidemiológica de surtos de salmonelose ocorridos no período de 1999 a 2008 no Estado do Paraná, Brasil / Epidemiological data of salmonellosis outbreaks occured between 1999 and 2008 in Parana State, Brazil

No Paraná, são poucas as informações sobre a prevalência dos sorovares e fagotipos de Salmonella envolvidos em surtos. Este trabalho foi realizado com o objetivo de conhecer o perfil epidemiológico dos surtos de salmonelose notificados no Estado do Paraná entre janeiro de 1999 e dezembro de 2008. Neste período ocorreram 286 surtos nos quais 5.641 pessoas foram expostas, 2.027 (35,9%) manifestaram sintomas da doença e 881 (16,3%) foram hospitalizadas. Cinquenta e dois municípios do Paraná (13,0%) notificaram surtos de salmonelose. Alimentos à base de ovos, carnes e derivados e produtos classificados como alimentos variados foram, respectivamente, associados a 45,0; 34,8 e 20,2% dos surtos. O sorovar prevalente foi Enteritidis, encontrado em 87,8% das cepas isoladas de pacientes e em 80,6% das cepas provenientes dos alimentos envolvidos nos surtos. Salmonella Enteritidis PT4 foi o fagotipo predominante, porém foi observada maior prevalência de PT9 a partir de 2003. Do total de surtos analisados, 49,7% estiveram associados a reuniões familiares. Esse fato sugere que as ações da Vigilância Sanitária devem assumir um caráter educativo, tanto para trabalhadores de estabelecimentos comerciais quanto para manipuladores domésticos.

Epidemiological data of foodborne diseases in Brazil are scarce. In Paraná State, there is little information on the prevalence of Salmonella serovars and fagotypes involved in outbreaks. The aim of this study was to evaluate epidemiological data of salmonellosis outbreaks notified in Paraná State between January 1999 and December 2008. During the study period, 286 Salmonella outbreaks occurred and a total of 5,641 people were exposed, 2,027 (35.9%) became ill, and 881 (16.3%) were hospitalized. Fifty-two cities (13.0%) in Paraná notified Salmonella outbreaks. Eggs and egg products, meat and meat products and other foods were, respectively, associated with 45.0, 34.8 and 20.2% of the notified outbreaks. Serovar Enteritidis was prevalent and identified in 87.8% of the strains isolated from patients and in 80.6% of the strains isolated from food involved in outbreaks. Salmonella Enteritidis PT4 was the prevalent phagotype. However, a prevalence of PT9 occurred after 2003. Of the total number of outbreaks analyzed, 49.7% occurred in residences. This result indicates that educational actions of the State Food Safety and Inspection Service should be for both commercial and domestic food handlers.

Biofilmes microbianos e resistência aos sanitizantes: uma revisão / Microbial biofilms and resistance to sanitizers: a review

Os biofilmes são estruturas altamente organizadas, nas quais microrganismos crescem e sobrevivem a ambientes hostis. São definidos como complexos ecossistemas microbianos, embebidos em uma matriz de substâncias poliméricas extracelulares (EPS), aderidos a uma superfície. Se microrganismos não forem completamente removidos das superfícies de contato durante a desinfecção, biofilmes podem ser formados e se tornarem uma fonte constante de contaminação de alimentos. Os microrganismos aderidos são mais resistentes aos sanitizantes que as células livres. Porém, a eficácia de um sanitizante depende do tipo de microrganismo, da natureza do sanitizante e da superfície de adesão. A compreensão de como os biofilmes podem ser formados é importante para a manutenção da qualidade e segurança dos alimentos. O objetivo deste trabalho foi fazer uma revisão sobre a formação de biofilme e a sua resistência aos sanitizantes.

Avaliação microbiológica de alimentos isentos de registrono Ministério da Saúde / Microbiological analysis of foods exempt of legal registration procedures

O objetivo deste trabalho foi avaliar o padrão higiênico-sanitário de alimentos comercializados na Regiãode Londrina cadastrados no Ministério da Saúde, porém, dispensados de registro, conforme a RDC nº.23 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA). Os alimentos foram escolhidos de acordo comas sugestões da Vigilância Sanitária de Londrina, PR, que levou em consideração o risco epidemiológico.Os padrões microbiológicos foram avaliados conforme a RDC nº. 12 da ANVISA. Contagens de E. colie S. aureus acima do permitido foram observadas respectivamente em 11 (18,3%) e 13 (21,6%) dos 60alimentos analisados. Os demais resultados microbiológicos estavam dentro do estabelecido pela RDCnº. 12. Ficou clara a necessidade de maior fiscalização do processamento e armazenagem de váriosalimentos analisados, em especial, sorvetes, massas recheadas, pães de queijo, lasanha, doces comcreme e salgados recheados. Esses resultados serão encaminhados às Vigilâncias Regional e Municipalalertando sobre a real potencialidade desses alimentos veicularem doenças e na intenção de abrir umadiscussão sobre a liberação ou não de registro desses alimentos junto ao Ministério da Saúde. Alémdisso, os resultados obtidos confirmam que a análise microbiológica do produto final é um instrumentoessencial de validação e verificação das Boas Práticas de Fabricação (BPF) e da Análise de Perigos ePontos Críticos de Controle (APPCC).

The aim of this study was to analyze the sanitary quality of foods commercialized in Londrina, Paraná that are exempt of Brazilian Health Ministry registration procedures, according to Resolution n°. 23 from the National Sanitary Administration Agency (ANVISA). The food categories analyzed were chosenaccording to ANVISA, Londrina, PR which took the epidemiological risk in account. Microbiologicalstandards were evaluated according to ANVISA Resolution n°. 12. Escherichia coli and coagulase positive Staphylococcus counts were above standards in 11 (18.3%) and 13 (21.6%) of food samples analyzed, respectively. The others microbiological results were in conformity to ANVISA Resolution n°.12. These results indicate inadequate sanitary conditions during food processing especially for ice-cream, stuffed pasta, "pães de queijo", lasanha, cream felled pastries, and "salgado recheado". The results could help the State and Local Sanitary Administration Agencies to evaluate the potentiality of these foods cause food-borne diseases and the adequacy of their liberation from Brazilian Health Ministry registration procedures. The results also show that microbiological analysis of the final product is a valuable validation and verification procedure for the GMP and HACCP system.

A comparison between enzyme immunoassay and HPLC for ochratoxin A detection in green, roasted and instant coffee

An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) for ochratoxin A (OTA) detection in green, roasted and instant coffees was developed using anti-OTA monoclonal antibody. Immunological reagents prepared were OTA-BSA (4.76 mg/mL), anti-OTA.7 MAb (2x10³-fold dilution) and HRP-anti IgG (10³-fold dilution). The detection limit was 3.73 ng OTA/g and correlation coefficients (r) between this immunoassay and high performance liquid chromatography were 0.98 for green coffee, 0.98 for roasted and 0.86 for instant. OTA levels detected by ic-ELISA were higher than by HPLC, with ELISA/HPLC ratio of 0.66 - 1.46 (green coffee), 0.96 - 1.11 (roasted) and 0.93 - 1.82 (instant). ELISA recoveries for OTA added to coffee (5 - 70 ng/g) were 81.53 percent for green coffee, 46.73 percent for roasted and 64.35 percent for instant, while recoveries by HPLC were 80.54 percent, 45.91 percent and 55.15 percent, respectively. Matrices interferences were minimized by samples dilution before carrying out the ELISA assay. The results indicate that MAb-based ic-ELISA could be a simple, sensitive and specific screening tool for OTA detection, contributing to quality and safety of coffee products.

ELISA competitivo indireto (ic-ELISA) baseado em anticorpos monoclonais foi desenvolvido para a detecção de ocratoxina A (OTA) em café verde, torrado e instantâneo. Os reagentes imunológicos necessários à reação consistiram de OTA-BSA (4,76 mg/mL), anti-OTA.7 MAb (diluído 2x10³) e anti IgG-HRP (diluído 10³), apresentando limite de detecção de 3,73 ng OTA/g. Os coeficientes de correlação (r) entre o imunoensaio e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foram de 0,98 (café verde), 0,98 (torrado) e 0,86 (instantâneo). Ic-ELISA detectou valores superestimados de OTA em relação a CLAE, com valor ELISA/CLAE variando de 0,66 - 1,46 (café verde), 0,96 - 1,11 (torrado) e 0,93 - 1,82 (instantâneo). As recuperações médias de OTA adicionada em café (5 - 70 ng/g) foram de 81,53 por cento (café verde), 46,73 por cento (torrado) e 64,35 por cento (instantâneo) por ELISA, em relação a 80,54 por cento, 45,91 por cento e 55,15 por cento por CLAE, respectivamente. A interferência de matriz no imunoensaio foi minimizada pela diluição das amostras previamente à análise por ELISA. O ic-ELISA desenvolvido pode ser considerado uma técnica alternativa simples, sensível e específica para análise de OTA, contribuindo para a qualidade e segurança de produtos de café.

Salmonella spp: o ovo como veículo de transmissão e as implicações da resistência antimicrobiana para a saúde pública / Salmonella spp: the egg as vehicle of transmission and the implications of antimicrobial resistance for public health

A salmonelose é uma das doenças transmitidas por alimentos de maior prevalência, no Brasil e no mundo, apresentando um aumento acentuado e contínuo no número de casos relatados desde a década de 70. Os principais alimentos incriminados na veiculação de samonelose são os ovos e seus derivados, sendo que a manipulação desempenha um papel importante na disseminação da bactéria, por propiciar contaminação cruzada no ambientede preparo de alimentos. No Estado do Paraná, o ovo aparece como o alimento incriminado na maior parte dos surtos de salmonelose desde 1993. Além disso, o emprego de antibióticos na produção animal, com objetivos profiláticos, terapêuticos e ou de promoção de crescimento, tem contribuído para a emergência de cepas de Salmonella resistentes a estes fármacos, o que pode dificultar o tratamento de infecções extra-intestinais causadas pela bactéria. Desta forma, este trabalho teve por objetivo revisar a contaminação de ovos e derivados por Salmonella spp. e as implicações da resistência antimicrobiana desta bactéria para a saúde pública.

Avaliação da contaminação por Staphylococcus aureus e Salmonella spp., de maionese de batata comercializada em Londrina, PR / Evaluation of the cotamination by Staphylococcus aureus and Salmonella spp., of potato salad purchased at restaurants of Londrina, PR

Salada de batata com maionese caseira preparada com ovos crus é freqüentemente manipulada de maneira inadequada, podendo ser facilmente cntaminada com microrganismos. Esse alimento tem sido associado a casos e surtos de intoxicação estafilocócica e salmonelose em Londrina, Paraná. Porém, não existem dados sobre a contaminação, por Staphylococcus aureus e Salmonella spp., de maioneses de batata comercializadas em restaurantes dessa cidade. Baseado nestes fatos, o objetivo foi avaliar a presença nesse alimento de S. aureus enterotoxigênico e Salmonella spp. Foram coletadas 50 amostras de "maionese de batata" em restaurantes situados na cidade de Londrina, em sua maioria "self-service". As coletas foram orientadas pela Vigilância, levando-se em consideração o risco epidemiológico. As técnicas de preparo das amostras, contagem de Staphylococcus aureus e pesquisa de Salmonella spp. seguiram o preconizado pelo Food and Drug Administration (FDA) Bacteriological Analytical Manual. Embora não tenha sido isolada Salmonella spp. das amostras analisadas ressalta-se a importância desse alimento como veículo de transmissão dessa bactéria, já que vários autores indicaram esse alimento como o responsável por salmonelose humana.

Cromatografia de afinidade com íon de CU2: eliminaçäo de falso-positivos na detecçäo de esnterotoxina estafilocócica / CU2 affinity chromatography: elimination of false-positive in the detection of staphylococcal enterotoxin

Avaliou-se a aplicaçäo da cromatografia de afinidade com íon Cu2 para minimizar a interferência de componentes alimentares na detecçäo de enterotoxinas estafilocócicas mediante imunoensaio, baseado em aglutinaçäo de látex 9RDPLA). Os ensaios preliminares com "chantilly" contaminado com 25 ng de enterotoxina estafilocócica A (EEA) indicaram que a cromatografia de afinidade com íon Cu2 eliminou interferentes que causavam reaçäo falso-positiva em RPLA. a eficiência do procedimento de limpeza foi testada em 15 extratos alimentares (de surtos e/ou com alta contagem estafilocócica), compreendendo vários tipos de alimentos comumente consumida no Brasil. Onze extratos alimentares apresentaram um pico único de eluiçäo com perfis semelhantes e as fraçöes testadas por RPLA demonstraram EEA (4 alimentos), EEB (1), EEA + EEB (3), EEA + EED (2) e EEA + EEB + EED (1). Os problemas de reaçöes inespecíficas com "kit" RPLA em 2 extratos de bolos recheados foram eliminados, indicando que a adoçäo desta operaçäo evitaria a reaçäo falso-positiva

Adiçäo de íon magnésio, potássio e vitaminas visando ao meio de cultura para a produçäo de enterotoxina estafilocócica A / Addition of magnesium, potassium ion and vitamins in culture media for staphylococcal enterotoxin A production

Staphylococcus aureus é um patógeno freqüentemente envolvido em surtos de intoxicaçäo alimentar. A detecçäo rápida e eficaz da toxina é fundamental para o diagnóstico e tratamento da doença. Com o objetivo de produzir enterotoxina estafilocócica A (EEA), destinada à produçäo de reagentes imunológicos, testaram-se 21 formulaçöes baseadas em hidrolisado de caseína (peptona, triptona e casitona) adicionadas de tiamina, niacina, Mg²+, K+ e/ou extrato de levedura. Os meios inoculados de S. aureus linhagem 722 foram incubados a 37ºC (220 rpm, 24 horas) e os sobrenadantes (10.000 g. 15 min a 4ºC) testados quanto à produçäo de EEA (RPLA, aglutinaçäo de látex) e exoproteínas totais (método de Bradford). A melhor produçäo de toxina (92,6 µg/mL de EEA) foi obtida no meio com triptona adicionada de tiamina e niacina, seguida de triptona adicionada de extrato de levedura e K+ (87 µg/mL). A combinaçäo tiamina + niacina + Mg²+ reduziu a produçäo de EEA, em relaçäo ao meio básico triptona ou peptona. O extrato de levedura com triptona aumentou a produçäo de EEA (59,6 µg/mL), porém em menor grau do que a combinaçäo niacina + tiamina (92,6 µg/mL). Considerando o seu menor custo em relaçäo à tiamina e à niacina, elegeu-se a triptona de caseína 3 por cento acrescida de 1 por cento de extrato de levedura para a produçäo de EEA, visando à purificaçäo. O trabalho atingiu o objetivo proposto e pode contribuir para incrementar a difusäo de método imunológico, com a possibilidade de atender ao controle de qualidade na condiçäo nacional.

Diagnóstico laboratorial e importância clínica da Gardnerella vaginalis em pacientes com infecçäo vaginal / Laboratory diagnosis and clinical importance of Gardnerella vaginalis in patients with vaginal infections

Foram estudados fluxos cérvico-vaginais de 145 pacientes ambulatoriais com idades entre 16 e 52 anos. Sessenta e cinco pacientes, que apresentavam sintomas clínicos de infecçäo vaginal foram enquadrados no grupo das sintomáticas. Setenta e seis pacientes sem infecçäo genital, aparente, constituiram o grupo controle, onde näo houve isolamento de Gardnerella vaginalis. Das 65 pacientes sintomáticas 19 (29%) apresemtaram G. vaginalis no seu trato genital, 12 (18%) Trichomonas vaginalis e 7 (11%) Candida albicans. Apenas em um dos casos houve associaçäo de G. vaginalis e T. vaginalis. Neste estudo a G. vaginalis foi o mais importante patógeno isolado de mulheres com infecçäo vaginal